如何用Feyond-F100熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行重組C因子內(nèi)毒素檢測(cè)

細(xì)菌內(nèi)毒素是一類由細(xì)菌產(chǎn)生的體內(nèi)毒素，通常存在于細(xì)菌外膜中的脂多糖中。當(dāng)細(xì)菌死亡或細(xì)菌墻受損時(shí)，這些脂多糖會(huì)被釋放到周圍環(huán)境中，而且具有非常強(qiáng)的毒性。在人體內(nèi)，血液循環(huán)系統(tǒng)將其傳輸?shù)礁鱾€(gè)器官和組織中，從而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)產(chǎn)生過度炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡、壞死等病理變化。內(nèi)毒素普遍存在且不易滅活，在制藥和醫(yī)療器械行業(yè)中，靈敏可靠的內(nèi)毒素分析技術(shù)是非常必須的。

2024-09-12 09:28:07南京辰雨凡麗商貿(mào)有限公司16

鱟試劑廣泛用于檢測(cè)醫(yī)藥產(chǎn)品中的細(xì)菌內(nèi)毒素，但由于鱟資源稀缺，制約了鱟試劑的生產(chǎn)。重組C因子（Recombinant Factor C，rFC）作為鱟試劑的替代品，通過基因重組表達(dá)獲得，與內(nèi)毒素結(jié)合后被激活的重組C因子能切割底物獲得游離的熒光基團(tuán)，熒光基團(tuán)的釋放和內(nèi)毒素的濃度成正比。因此，可根據(jù)熒光強(qiáng)弱來定量測(cè)定內(nèi)毒素含量。

奧盛Feyond-F100熒光酶標(biāo)儀針對(duì)重組C因子內(nèi)毒素?zé)晒鈾z測(cè)應(yīng)用，定制化軟件分析方法，實(shí)現(xiàn)標(biāo)曲擬合、樣品濃度定量及回收率的計(jì)算，從而達(dá)到實(shí)驗(yàn)操作與結(jié)果輸出的一體化。

圖1 傳統(tǒng)鱟試劑（左）與rFC（右）檢測(cè)內(nèi)毒素的原理比較

實(shí)驗(yàn)材料

試劑盒名稱：Rhinogen?重組C因子內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：RAF-01/02）

儀器：奧盛 Feyond-F100熒光酶標(biāo)儀

實(shí)驗(yàn)方法

加樣完成后，分別讀取0h與37℃孵育1h后的熒光檢測(cè)值，用陰性對(duì)照的熒光差值（ΔRFU）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品熒光讀數(shù)差值（ΔRFU）進(jìn)行校準(zhǔn)得到凈熒光差值。凈熒光差值的對(duì)數(shù)與內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)呈比例，且在0.005 至5.0 EU/mL 范圍內(nèi)呈線性。

圖2 Rhinogen^?重組C因子內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒的操作流程圖

熒光酶標(biāo)儀參數(shù)設(shè)置

表1 酶標(biāo)儀檢測(cè)參數(shù)

檢測(cè)模式	熒光
檢測(cè)類型	C因子
檢測(cè)波長(zhǎng)	EX/EM: 380/440 nm
PMT增益	自動(dòng)增益
積分時(shí)間	40 μs

定制重組C因子軟件界面

標(biāo)準(zhǔn)品與樣品布局及參數(shù)界面

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實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Feyond-F100熒光酶標(biāo)儀滿足Rhinogen?重組C因子內(nèi)毒素測(cè)定試劑盒的測(cè)試要求，軟件可自動(dòng)擬合出凈熒光差值（log值）和濃度（log值）的標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用四個(gè)梯度的內(nèi)毒素稀釋液(濃度從0.005 EU/mL到5 EU/mL)進(jìn)行檢測(cè)，R²值為 0.99977，標(biāo)準(zhǔn)曲線在這一擴(kuò)展的濃度范圍內(nèi)顯示出良好的線性。

標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品濃度顯示界面

樣品回收率判斷界面

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Feyond-F100熒光酶標(biāo)儀可選配符合重組C因子內(nèi)毒素檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的定制濾光片，獨(dú)立的算法分析軟件可滿足實(shí)驗(yàn)要求，方便快速的實(shí)現(xiàn)樣品的數(shù)據(jù)分析，提供直觀的結(jié)果展示。

關(guān)于奧盛

奧盛定位生命科學(xué)工具提供商，專注生命科學(xué)檢測(cè)設(shè)備及自動(dòng)化解決方案。公司圍繞生物樣品核酸蛋白純化、自動(dòng)化工作站，生物吸收光、熒光及發(fā)光檢測(cè)三大技術(shù)平臺(tái)，在生命科學(xué)領(lǐng)域進(jìn)行了深度布局。

目前，公司擁有省級(jí)高新技術(shù)企業(yè)研究院，是2022年第一批浙江省”專精特新”中小企業(yè)。